Comment est l'ADN visualisés à l'aide de gel d'électrophorèse?

Bromure d'éthidium

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Pour cette technique de visualisation, du bromure d'éthidium est mélangé avec la poudre d'agarose, un tampon EDTA et de l'eau pour former la matrice de gel avant une électrophorèse. En conséquence, les molécules de bromure d'éthidium deviennent dispersées uniformément dans toute la matrice. Une fois que les puits de la gel ont été remplis avec leurs échantillons d'ADN respectifs et colorants de suivi, la tension est appliquée pour dessiner lentement les grands, composés polaires à travers la matrice.
Pendant ce mouvement, les bases des molécules d'ADN se lient temporairement sur les particules de bromure d'éthidium, les traînant. Par électrophorèse sur le temps est terminée, chaque molécule d'ADN a repris à quantité importante de bromure d'éthidium.
En présence de lumière ultraviolette, de bromure d'éthidium présente fluorescence. Techniciens briller une lumière UV spécialement calibré à travers le gel pendant une machine capte l'image des fragments incandescents.

Si un transilluminateur UV ne sont pas disponibles ou pratique, les techniciens peuvent rendre visible l'ADN dans des conditions normales en trempant le gel d'agarose fini, avec l'ADN electrophoresized l'intérieur, dans une solution de nuit bleu de méthylène.
Un sel de chlorure avec un anion sensiblement hydrophobe, les molécules bleu de méthylène pénétrer la matrice de gel entière. Cependant, la liaison hydrogène à travers les molécules de l'ADN provoque des taches de s'accumuler. Cette densité de tache accrue autour de l'ADN donne une teinte plus foncée de bleu, visible à l'œil nu.

Au-delà de la taille relative des bandes d'ADN, les techniciens peuvent mesurer la taille absolue (en paires de bases) de chaque fragment en utilisant des produits chimiques appelés colorants de suivi. Colorants visibles sans l'addition de bleu de méthylène ou le bromure d'éthidium, le suivi tels que bleu de bromophénol cyanol mouvement et le xylene pour les matrices de gel pendant l'électrophorèse d'aragose à la même vitesse que les fragments d'ADN comprenant des nucléotides 300 et 4000 nucleotides, respectivement. En électrophorèse, les fragments d'ADN plus massives voyagent à travers la matrice de gel à une vitesse plus lente que des fragments plus petits.
Par conséquent, tout en suivant les colorants ne pas influencer directement la visibilité de fragments d'ADN, en comparant la position d'un fragment d'ADN dans le gel à la position de ces colorants à permettre aux techniciens "voir" le nombre approximatif de nucléotides du fragment d'ADN contient.